制備液相色譜開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱(chēng)為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(cháng)。液相色譜法是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。它與經(jīng)典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì )引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱(chēng)高壓液相色譜法。又因分析速度快而稱(chēng)為高速液相色譜法，也稱(chēng)現代液相色譜。

 

　　制備液相色譜分類(lèi)：

 

　　1、液液色譜法：使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔體表面，或化學(xué)鍵合于擔體表面而形成的固定相，分離原理是根據被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)分配平衡過(guò)程。

 

　　2、液固色譜法：使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附-解吸附的平衡過(guò)程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構體。

 

　　隨著(zhù)柱填料的快速發(fā)展，反相色譜法的應用范圍逐漸擴大，現已應用于某些無(wú)機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過(guò)程的解離，常用緩沖液控制流動(dòng)相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8)，太高的pH值會(huì )使硅膠溶解，太低的pH值會(huì )使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH1.5~10范圍操作。